Szybkie wykrywanie paciorkowców grupy B u kobiet w ciąży przy porodzie ad

Co więcej, kultury te są ujemne u niektórych kobiet, których niemowlęta następnie zakażone są paciorkowcami grupy B8. Z drugiej strony stosowanie profilaktyki antybiotykowej na podstawie oceny ryzyka prowadzi do niepotrzebnego leczenia u wielu kobiet.2-5 Szybki test przesiewowy dla paciorkowców grupy B, który mógłby dokładnie zidentyfikować ciężarne kobiety niosące bakterie w momencie porodu, pozwoliłby uniknąć konieczności prenatalnego badania przesiewowego4 i zmniejszyć stosowanie profilaktyki antybiotykowej u kobiet, które nie są skolonizowane. W związku z tym dokonaliśmy prospektywnej oceny szybkości i dokładności standardowej metody hodowli oraz dwóch testów DNA – testu konwencjonalnej reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) i szybkiego testu PCR – w celu identyfikacji kolonizacji paciorkowcami grupy B u kobiet w ciąży w tym czasie dostawy.
Metody
Projekt badania
Badanie zostało zatwierdzone przez komisję etyki badawczej Centrum Hospitalier Universitaire de Québec, a wszystkie kobiety wyraziły pisemną zgodę. Przebadaliśmy 112 kobiet w ciąży, które zostały hospitalizowane z powodu porodu. Okazy wydzieliny analnej, dopochwowej i łącznej wydzieliny pochwy i odbytu uzyskano od wszystkich kobiet wkrótce po przyjęciu. W przypadku 57 kobiet, których membrany były nietknięte w chwili przyjęcia, drugą próbkę uzyskano po pęknięciu błon.
Kolekcja i kultura okazów
Wszystkie próbki zebrano w komercyjnie przygotowanym systemie zbierania i transportu aerobów i beztlenowców (Culturette, Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, Md.). W przypadku próbek pobranych od analny wymaz ostrożnie umieszczono około 2,5 cm poza zwieraczem odbytu, a następnie delikatnie obrócono, aby dotknąć krypt analnych. W przypadku próbek pobranych z pochwy nadmierne wydzieliny lub wydzielina zostały usunięte, a wydzieliny z błony śluzowej dolnej części pochwy uzyskano za pomocą wacika. W przypadku połączonych próbek pobranych z pochwy i odbytu wymaz najpierw włożono do pochwy, a następnie do odbytu, jak opisano powyżej. Ampułki zawierające 0,5 ml pożywki transportowej bakterii Stuarta zostały zmiażdżone, a wymaz został nasączony podłożem bezpośrednio po uzyskaniu próbki. Wszystkie trzy rodzaje próbek były transportowane w temperaturze pokojowej i były hodowane i testowane za pomocą testów PCR w Centrum Badań Zakaźnych Chorób Uniwersytetu Laval w ciągu 24 godzin po pobraniu. Ta sama próbka została użyta do standardowej hodowli i testów PCR.
W celu identyfikacji paciorkowców grupy B, próbki inkubowano w GNS, standardowym selektywnym podłożu bulionowym, które składa się z bulionu Todd-Hewitt uzupełnionego gentamycyną (8 .g na mililitr) i kwasem nalidyksowym (15 .g na mililitr) .4 Minimum Wymagane było 36 godzin inkubacji w celu zidentyfikowania paciorkowców grupy B.
Przygotowanie próbek do testów PCR
W przypadku testów PCR, 10 .l podłoża transportowego przygotowano w postaci surowego lizatu z zestawem do ekstrakcji DNA (Infectio Diagnostic, Sainte-Foy, Kanada) zgodnie z instrukcjami producenta. Oczyszczone genomowe DNA z paciorkowcami grupy B, stosowane jako kontrola pozytywna, przygotowano z użyciem komercyjnego zestawu (G Nome, Bio101, Vista, CA) zgodnie z instrukcjami producenta.
Primery i sondy
Mieszanina reakcyjna PCR zawierała startery specyficzne dla paciorkowców grupy B, Sag 059 i Sag 190, w celu amplifikacji zarówno genomowego DNA, jak i wzorca kontroli wewnętrznej. 9 Dwie pary fluorescencyjnie znakowanych sąsiednich sond hybrydyzacyjnych, STB-F i STB-C i 1C -F i 1C-C, były również stosowane do szybkiego testu PCR do wykrywania odpowiednio amplikonów specyficznych dla paciorkowców grupy B i amplikonów z kontrolą wewnętrzną9.
Konwencjonalny test PCR
W przypadku konwencjonalnego testu PCR, 2 .l surowego lizatu dodano do mieszaniny reakcyjnej PCR
[więcej w: czynniki ryzyka cukrzycy typu 2, kłykciny kończyste, przetoka ślinowa ]
[przypisy: mroczki przed oczami, mąka żytnia pełnoziarnista, kalenistyka plan treningowy ]